3.2 ТИАБ субретинальной жидкости

    Эксперимент по проведению ТИАБ субретинальной жидкости (СРЖ) проводился на 28 энуклеированных глазах. В рамках эксперимента разрабатывалась хирургическая методика получения СРЖ и необходимый инструментарий, а также оценивался ее потенциал с точки зрения информативности материала.

    Средняя высота проминенции опухоли в энуклеированных глазах по данным В-сканирования составила 9,6 мм (min 3,1 мм, max 14,8 мм), средний размер основания по наибольшему значению – 15,1 мм (min 10,1 мм, max 20,3 мм), средняя высота отслойки сетчатки – 5,4 мм (min 1,5 мм, max 12,6 мм).

    Хирургическая техника ТИАБ СРЖ имеет ряд особенностей, отличающих ее от ТИАБ опухолевого очага. В первую очередь они обусловлены различием в плотности субретинального содержимого и собственно ткани опухоли. При попытке введения инструмента (иглы, соединенной с аспирационной системой) в зону экссудативной отслойки сетчатки ее пункция представляется невозможной ввиду слабого обратного механического сопротивления со стороны субретинального содержимого. С целью создания ретинального дефекта, через который впоследствии возможна аспирация СРЖ, сетчатка надсекалась с помощью эндовитреальных ножниц (Grieshaber Revolution 25+ DSP Curved Scissors 705.52, Alcon) с последующим введением биопсийной иглы в зону СРЖ (рисунок 12А). Наиболее щадящим, но также технически трудноосуществимым является введение иглы в паратуморальную зону, где отслойка сетчатки распространяется по склонам новообразования сосудистой оболочки (рисунок 12Б).

    Описание этой техники легло в основу нового способа получения биопсийного материала при внутриглазных образованиях (заявка на изобретение №2023103910).

    Определение мутаций в генах GNAQ и GNA11, «драйверных» и наиболее распространенных мутаций УМ, проводилось методом супер-АС-ПЦР-РВ.

    Также оценивалась концентрация ДНК в образцах ТИАБ СРЖ, ТИАБ опухолевого очага и по гистологическому материалу с парафинового блока. ДНК выделяли с помощью набора реагентов ExtractDNA FFPE (ЗАО «Евроген», Москва, Россия) в соответствии с инструкцией производителя.

    Материал ТИАБ СРЖ оценивался во всех 28 образцах (100%), материал ТИАБ опухолевого очага в 23 образцах (82%), гистологический материал парафиновых блоков в 9 образцах (32%). Результаты представлены в таблице 1.

    В рамках проведенного эксперимента информативность ТИАБ СРЖ составила 32% (9 информативных образцов), ТИАБ опухолевого очага 91% (21 информативный образец), гистологического материала – 100% (9 информативных образцов).

    Средняя концентрация ДНК в образцах ТИАБ СРЖ составила 1,15 нг/мл, ТИАБ опухоли – 20,67 нг/мл, в гистологическом материале – 106,8 нг/мл.

    Примечательно, что в 43% случаев (n=10) концентрация ДНК в материале ТИАБ СРЖ была выше, чем в материале ТИАБ опухоли, что, однако, не влияло на итоговую информативность материала. Уровень концентрации ДНК в материале ТИАБ СРЖ был ожидаемо и статистически значимо ниже в сравнении с образцами гистологического материала (p < 0,01, критерий Уилкоксона), однако при сравнении с концентрацией ДНК в материале ТИАБ опухолевого очага разница не была статистически значимой (p = 0,27, критерий Уилкоксона).

    В одном случае при подозрении на субретинальную диссеминацию опухолевых клеток по клиническим данным (офтальмоскопическая картина, данные ОКТ) была проведена ТИАБ как опухолевого очага, так и зоны отслойки сетчатки с СРЖ, подозрительной по содержанию на опухолевые клетки (рисунок 13). ТИАБ опухолевого очага проводилась по стандартной технике, ТИАБ СРЖ – через предварительно сформированную с помощью эндовитреальных ножниц насечку в сетчатке в зоне обширной экссудативной отслойки.

    Данный пациент не входил в ретроспективно-проспективную группу исследования. Согласно полученным результатам цитологического исследования, в материале СРЖ обнаружено 10% веретенообразных клеток с пигментированной цитоплазмой, а материал, полученный из опухолевого очага, цитологически оказался неинформативен.