3.5 Оценка выживаемости и жизнеспособности 3D сфероидов ретинального пигментного эпителия после нормотермического культивирования

     Для исследования использовались сфероиды на 3-и, 7-е, 11-е, 20-е и 30-е сутки культивирования.

    Половину сфероидов перемещали в пробирки типа «Эппендорф», окрашивали флюоресцентным маркером «Live and Dead» и изучали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа. Оставшиеся сфероиды переносились в чашку Петри объемом 5 мл и заливались 2 мл питательной среды стандартного состава. Затем чашку Петри помещали в CO₂ -инкубатор на 14 дней, смену питательной среды осуществляли каждые 2-3 дня. Затем через 3 часа, через 1 сутки, далее ежедневно исследовали при помощи инвертированного микроскопа адгезивные свойства сфероидов и их способность к спредингу.

    Во время проведения лазерной сканирующей конфокальной микроскопии после окрашивания 3D сфероидов РПЭ маркером «Live and Dead» было выявлено, что полученные трехмерные культуры сохраняют свою жизнеспособность на всех сроках наблюдения. Все сфероиды полностью состояли из жизнеспособных клеток. Количество «мертвых» клеток было минимально и не превышало допустимых значений.