Рисунок 17 – Глаз кролика группы А в различные сроки после введения в ожоговое бельмо роговицы коллагенового имплантата без добавления фактора роста: А – 14 дней; Б – 30 дней; В – 3 месяца; Г – 6 месяцев
Рисунок 18 – Глаз кролика группы Б в различные сроки после введения в ожоговое бельмо роговицы коллагенового имплантата, содержащего 30 мкг rhBMP-2: А – 14 дней; Б – 30 дней; В – 3 месяца; Г – 6 месяцев
В группе А в заранее подготовленное ожоговое бельмо роговицы кролика был введен коллагенновый имплантат без rhBMP-2. В силу изначально мутных тканей бельма и наличия в нём определенного количества сосудов, оценивать клиническую картину было несколько затруднительно. Через 14 дней глаза экспериментальных животных были умеренно раздражены, во всех случаях наблюдалась перилимбальная инъекция и нарастание интенсивности помутнения роговицы в центральной зоне, а также поверхностная неоваскуляризация роговицы (Рисунок 17А). Дальнейшая клиническая картина была без изменений (Рисунок 17Б). К концу трех месяцев наблюдения у двух кроликов этой группы отмечалось снижение интенсивности помутнений в периферических отделах бельма и уменьшение неоваскуляризации, роговица в этих зонах выглядела более прозрачной (Рисунок 17В). К концу 6 месяцев у всех животных площадь центральных помутнений роговицы и их интенсивность значительно уменьшились (Рисунок 17Г).
Таким образом, клинические изменения, наблюдаемые в послеоперационном периоде в ткани бельма, можно охарактеризовать как незначительные воспалительные реакции с дальнейшей стабилизацией клинической картины и постепенным запустеванием сосудов, а также снижением интенсивности помутнений.
Рисунок 19 – Срез роговицы кролика группы А через 1 месяц после имплантации коллагенового имплантата без добавления rhBMP-2: 1 – имплантат; 2 – очаг врастания созревающей соединительной ткани; 3 – новообразованные сосуды; 4 – разнонаправленность коллагеновых волокон стромы; 5 – эпителий; 6 – десцеметова мембрана с эндотелием. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х 120
Рисунок 20 – Срез роговицы кролика группы А через 3 месяца после имплантации коллагенового имплантата без добавления rhBMP-2. 1 – имплантат; 2 – новообразованные сосуды; 3 – очаг врастания созревающей соединительной ткани; 4 – зрелая соединительная ткань; 5 – разнонаправленность коллагеновых волокон стромы; 6 – участок отсутствия эпителия. Окраска гематоксилином и эозином. А – увеличение х120; Б – увеличение х200
В этой группе, несмотря на наличие исходного бельма роговицы, клиническая картина была более выраженная. Через 14 дней после операции во всех случаях наблюдались тотальное бельмо и хорошо заметная неоваскуляризация, распространяющаяся по всей площади (Рисунок 18А). Через 30 дней после операции у кроликов группы Б выявлено усиление неоваскуляризации, появление новых глубоких сосудов микроциркуляторного русла (Рисунок 18Б). К концу 3 месяцев интенсивность помутнений и неоваскуляризация продолжали прогрессировать. У одного кролика отмечалось усиление перикорнеальной инъекции (Рисунок 18В). К концу 6 месяцев после операции наблюдалось интенсивное бельмо роговицы, захватывающее преимущественно центральную и парацентральную зоны с выраженной неоваскуляризацией, новообразованные сосуды в центральной зоне роговой оболочки формируют мощную капиллярную сеть.
В исследуемых образцах, через один месяц наблюдались скопление экссудата и повышенная клеточность за счет большого числа преимущественно фибробластов. Имплантат сохранялся на всём протяжении, по сравнению с результатами имплантации коллагена в нативную роговицу отмечалась его выраженная гидратированность и, соответственно, утолщение, в него активно проникали клетки, имелись признаки персистирующего хронического воспаления тканей ожогового бельма. Пучки коллагеновых волокон стромы разнонаправлены и различной толщины. Имелись старые, хорошо сформированные сосуды микроциркуляторного русла, однако тенденции к неоваскуляризации не наблюдается. Передний эпителий толщиной от 2 до 5 слоев. Передняя пограничная (боуменова) мембрана неравномерной толщины. Задняя (десцеметова) мембрана, как и прилежащий к ней слой стромы (слой Дюа), были сохранены в большей степени, но с выраженным и неравномерным склерозом и отеком. Задний эпителий (эндотелий) местами отслоен (Рисунок 19).
Рисунок 21 – Срез роговицы кролика группы А через 6 месяцев после имплантации коллагенового имплантата без добавления rhBMP-2: 1 – имплантат; 2 – очаг врастания созревающей соединительной ткани; 3 – новообразованные сосуды; 4 – зрелая соединительная ткань; 5 – разнонаправленность коллагеновых волокон стромы; 6 – эпителий; 7 – десцеметова мембрана с эндотелием; 8 – плотноупакованные волокна. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х 120
Рисунок 22 – Срез с захватом радужки и цилиарного тела после введения в роговицу кролика группы А коллагенового имплантата без rhBMP-2: А – 1 месяц, Б – 6 месяцев; 1 – цилиарное тело; 2 – цилиарные отростки; 3 – радужная оболочка. Окраска гематоксилином и эозином, х 120
Через 6 месяцев отмечена лучшая интеграция коллагенового носителя с окружающими тканями, толщина среза центральной части бельма несколько меньше чем в предыдущих образцах, коллагеновые волокна плотно упакованы, их ход разнонаправленный. Наблюдается тенденция к постепенному расщеплению имплантата и уплотнению тканей, в остальном морфологическая картина без кардинальных изменений. В представленном ниже образце коллагеновый имплантат частично сохранён, с участками истончения, расщепления и очагами зрелой соединительной ткани. Вокруг имплантата, особенно между ним и передним эпителием, обнаруживаются разнонаправленные пучки плотно-А Б упакованных коллагеновых волокон и обилие фибробластов. Выявляются единичные новообразованные хорошо сформированные сосуды микроциркуляторного русла. Передний эпителий толщиной от 3 до 5 слоев, с дистрофическими изменениями эпителиоцитов. Передняя пограничная (боуменова) и задняя (десцеметова) мембраны имеют волнистый ход, перед няя мембрана местами плохо прослеживается (Рисунок 21).
3.5.2. Результаты гистологического исследования
Группа А с введением в ожоговое бельмо коллагенового имплантата без rhBMP-2
Рисунок 23 – Срез роговицы кролика группы Б через 1 месяц после имплантации коллагенового имплантата, содержащего 30 мкг rhBMP-2: 1 – имплантат; 2 – участок с множеством новообразованных сосудов, лимфо-макрофагальной, с примесью нейтрофилов и эозинофилов воспалительной инфильтрацией и отеком; 3 – группа клеток с бурым пигментом (гемосидерином); 4 – участок интеграции тканей бельма и имплантата; 5 – новообразованные сосуды; 6 – передний эпителий; 7 – эндотелий; 8 – акантоз эпителия, с неглубоким очаговым врастанием его в толщу стромы бельма; 9 – новообразованный сосуд. Окраска гематоксилином и эозином; А – увеличение х120; Б – увеличение х 200; В – увеличение х 400
Рисунок 24 – Срез роговицы кролика группы Б через 3 месяца после имплантации коллагенового имплантата, содержащего 30 мкг rhBMP-2: 1 – имплантат; 2 – участки замещения зрелой соединительной тканью с разнонаправленными пучками коллагеновых волокон и обилием фибробластов; 3 – новообразованные, хорошо сформированные сосуды микроциркуляторного русла; 4 – очаги лимфо-макрофагальной, с примесью эозинофилов и лейкоцитов, инфильтрации; 5 – передний эпителий; 6 – эндотелий. Окраска гематоксилином и эозином, х 120
Группа Б с введением в ожоговое бельмо коллагенового имплантата с rhBMP-2
исследуемых образцах, через один месяц наблюдалось появление очагов созревающей соединительной ткани. По сравнению с предыдущим экспериментом на этих сроках обнаруживается явно большее количество новообразованных сосудов. Имплантат сохранен на всем протяжении, как и в случае с имплантацией чистого коллагена в бельмо отмечается его гидратация.
Однако общее количество проникающих в его толщу клеток значительно выше, в некоторых участках наблюдалось его истончение и врастание грануляционной ткани и сосудов. Выше имплантата, вся строма была замещена молодой соединительной тканью, что не наблюдалось на таких сроках в эксперименте на нативной роговице. Вокруг имплантата, особенно между ним и боуменовой мембраной, выраженные разрастания грануляционной ткани с множеством новообразованных сосудов, лимфо-макрофагальной, с примесью нейтрофилов и эозинофилов, воспалительной инфильтрацией и отеком. В строме роговицы между имплантатом и десцеметовой мембраной эти изменения были выражены меньше, но там выявлялись группы клеток с бурым пигментом (характерно для сидерофагов с гемосидерином). Отдельные небольшие участки стромы, ближе к десцеметовой мембране, были относительно сохранны, но отечны и с повышенной клеточностью. Десцеметова мембрана и слой эндотелия местами отслоены от стромы и имели извитой ход. Передний эпителий неравномерной толщины, с пролиферацией клеток базального слоя и дистрофическими изменениями части эпителиоцитов, наблюдался акантоз эпителия, с неглубоким очаговым врастанием его в толщу стромы бельма (Рисунок 23).
В образцах через 3 месяца, наблюдалось истончение имплантата, который хотя и был сохранен на всем протяжении, но в значительно меньшей степени по сравнению с предыдущими образцами. Между ним и передним эпителием ткань бельма замещалась зрелой соединительной тканью с разнонаправленными пучками коллагеновых волокон и обилием фибробластов. Коллагеновые волокна имеют более плотную укладку. Выявлялись множественные новообразованные, хорошо сформированные сосуды микроциркуляторного русла, преимущественно выше имплантата. Под передней пограничной мембраной, субэпителиально, периваскулярно и местами по ходу имплантата фиксировались очаги лимфо-макрофагальной, с примесью эозинофилов и лейкоцитов, инфильтрации.
Рисунок 25 – Срез бельма роговицы кролика группы Б через 6 месяцев после имплантации коллагенового имплантата, содержащего 30 мкг rhBMP-2: 1 – имплантат; 2 – новообразованные сосуды; 3 – зрелая соединительная ткань; 4 – передний эпителий. Окраска гематоксилином и эозином: А – увеличение х 120; Б – увеличение х 200
Рисунок 26 – Срез с захватом радужки и цилиарного тела после введения в роговицу кролика группы Б коллагенового имплантата, содержащего 30 мкг rhBMP-2: А – 1 месяц, Б – 6 месяцев; 1 – цилиарное тело; 2 – цилиарные отростки; 3 – радужная оболочка. Окраска гематоксилином и эозином, х 120
Через 6 месяцев роговица умеренно и неравномерно утолщена, тенденция к истончению имплантата сохранялась, коллагеновые волокна имели ещё более плотную укладку. Соотношение участков зрелой и молодой соединительной ткани было резко смещено в сторону первой, местами ткань бельма полностью замещена зрелой соединительной тканью с разнонаправленными и плотно упакованными пучками коллагеновых волокон и обилием фибробластов. Общее количество новообразованных сосудов меньше, чем в предыдущем образце, наблюдалась тенденция к их запустеванию, однако крупные, хорошо сформированные сосуды оставались полнокровными и пронизывали всю строму бельма. Передний эпителий толщиной от 3 до 5 слоев, с дистрофическими изменениями эпителиоцитов (Рисунок 25).
Гистологические срезы угла передней камеры с захватом радужки и цилиарных отростков также показали отсутствие каких-либо изменений на всех сроках наблюдения (Рисунок 26).
Таким образом, наблюдаемые морфологические изменения в тканях бельма, такие как выраженный рост сосудов, постепенное истончение имплантата, формирование соединительной ткани и уплотнение упаковки коллагеновых фибрилл, наступающих в ответ на имплантацию носителя с rhBMP-2, имеют сходную последовательность, как и в тканях нативной роговицы экспериментальных животных. Однако в бельме скорость развития этих процессов несколько выше.
