4.1. Результаты двумерного культивирования выделенных клеток стромы роговицы человека в присутствии опорной пластины кератопротеза

     Целью данной части работы явилось изучение клеточной реакции на полимерную модель ОПК, потенциально пригодную для изготовления кератопротеза, на основании двумерного клеточного культивирования in vitro. Для достижения цели была поставлена задача: оценить биологическую совместимость различных моделей ОПК с культурой клеток стромы роговицы человека на основании пролиферации клеток и адгезии к материалу ОПК.

    Группы исследования были представлены двумя экспериментальными группами и группой контроля. В 1-ую экспериментальную группу включили 4 образца ОПК сетчатой структуры со сквозными квадратными отверстиями 200х200 мкм (модель ОПК №1). Ко 2-ой группе отнесли 4 образца ОПК сетчатой структуры со сквозными отверстиями трапециевидной формы и изменяющейся величины от периферии к центру от 170х130 мкм до 180х70 мкм (модель ОПК №2). Контрольную группу составила суспензия клеток в чашке Петри, для контроля роста клеточной культуры. Для определения адгезии клеток выполняли конфокальную микроскопию полимерной ОПК с использованием красителя Hoechst 33258 на сроке культивирования 9 суток.

    При выполнении световой микроскопии в каждой из экспериментальных групп отмечали тенденцию к планомерному увеличению количества клеток от 1-х к 9-ым суткам наблюдения, что свидетельствовало о сохранении пролиферативной активности КСР в присутствии полимера (рисунок 10).

     На снимках, полученных при выполнении конфокальной лазерно-сканирующей микроскопии 1-ой и 2-ой группы во всех случаях отмечали свечение ядер клеток, фиксированных на поверхности ОПК и в просвете сквозных отверстий (рисунок 11,12).

    Таким образом, в ходе выполнения клеточного культивирования, ожидаемым результатом явилось доказательство нетоксичной природы исследуемых моделей. В результате проведенного двумерного культивирования была доказана биосовместимость клеток стромы роговицы человека с материалом исследуемых моделей ОПК (in vitro), на основании сохранения пролиферативной активности и способности КСР к адгезии к поверхности ОПК в обеих группах, что говорит об их потенциальной пригодности к интрастромальной имплантации. Однако данный факт требует дальнейшего изучения исследуемых изделий в условиях in vivo, с целью выявления наиболее подходящей модели опорного элемента.