4.2. Результаты экспериментально-морфологического исследования влияния опорной пластины кератопротеза на кадаверную роговицу человека в эксперименте ex vivo

     Целью данной части работы явилось изучение в эксперименте особенностей клеточно-тканевой реакции на интеграцию и фиксацию полимерной опорной пластины кератопротеза в кадаверную роговицу человека с помощью метода органотипического культивирования.





    Для этого необходимо было решить следующие задачи: определить тканевую реактивность кадаверной роговицы человека на имплантацию разработанных ОПК в условиях органного культивирования методом сканирующей электронной микроскопии, оценить структурные изменения материала ОПК.





     Исследованию с применением СЭМ на сроке культивирования 90 суток, подвергли подготовленные, по описанной во 2-ой главе методике, экспериментальные образцы кадаверной роговицы, после проведения органотипического культивирования в питательной среде в условиях нормотермии.





    Группы исследования были представлены двумя экспериментальными группами и группой контроля. Экспериментальные группы включали роговицы кадаверных глаз со сформированными интрастромальными карманами (ИСК) и имплантированными ОПК. Контрольную группу составили выделенные роговицы кадаверных глаз с выполненным ИСК, но без имплантированных в его полость ОПК.





     В результате проведения СЭМ во всех образцах стромы роговицы было определено собственное вещество роговицы, представленное волокнистой структурой, состоящей из разно ориентированных коллагеновых волокон, погруженных в аморфное вещество. При рассмотрении образцов контрольной группы на поверхности «ложа» и «крышки» интрастромального кармана выявили исчерченность, что соответствовало наличию коллагеновых волокон (рисунок 13, 14). Данная картина стала примером для сравнения изменений, возникающих в полости ИСК в опытных группах, где проводили имплантацию ОПК.





    На поверхности «крышки» интрастромального кармана опытной группы №1 разнонаправленность коллагеновых волокон была более выражена, чем на поверхности «ложа» (рисунок 15, 16).





     На поверхности «крышки» и «ложа» интрастромального кармана опытной группы №2 определялась менее выраженная исчерченность коллагеновых волокон (рисунок 17,18).





    При выполнении СЭМ исследуемых моделей опорных пластин 1-ой группы отмечено образование фиброзной капсулы вокруг ОПК с прорастанием новообразованных волокон стромы роговицы в ячейки ОПК, при этом во второй группе наблюдали единичные участки с волокнами стромы роговицы в ячейках ОПК модели №2 и отсутствие капсулообразования на ее поверхности (рисунок 19,20).





     Обобщая результаты проведенных исследований тканевой реакции стромы роговицы кадаверного глаза можно заключить, что в 1-ой группе ОПК с равномерной сетчатой структурой отмечена реакция со стороны стромы роговицы более выраженная, по сравнению со 2-ой группой, что вероятно обусловлено структурой изделия и гидрофобными свойствами материала, о чем свидетельствуют данные сканирующей электронной микроскопии.





    Для оценки деградации материала до и после проведения органотипического культивирования выполняли фотографирование исследуемых ОПК двух моделей. Стоит отметить, что все образцы были прозрачны, имели гладкую поверхность. После выведения образцов из эксперимента, образцы полностью сохраняли свою форму, прозрачность и характер поверхности, т.е. не являлись биодеградирующими (рисунок 21, 22).





    Таким образом, в результате двумерного культивирования выделенных клеток стромы роговицы в присутствии исследуемых моделей при проведении фазово-контрастной и конфокальной лазерно-сканирующей микроскопии была выявлена пролиферативная активность и способность к адгезии клеток стромы роговицы к поверхности ОПК. В ходе исследования через 90 суток после имплантации исследуемых моделей ОПК в кадаверную роговицу человека по данным сканирующей электронной микроскопии было отмечено более выраженное формирование грубой соединительнотканной капсулы вокруг ОПК в группе №1. Из этого можно заключить, что данная модель является потенциально пригодной для имплантации в строму роговицы человека и может быть рассмотрена для внедрения в практику, как основа для изготовления кератопротеза.