Рисунок 29 – Гистологические срезы, окраска гематоксилин-эозин, ув. х 100, 1-я опытная группа. Трансплантаты РПЭ указаны стрелками а – 1-е сутки; б – 3-и сутки; в – 7-е сутки; г – 10-е сутки
Рисунок 30 – Гистологические срезы, окраска гематоксилин-эозин, ув. х 100, 2-я опытная группа. Трансплантаты РПЭ указаны стрелками а – 1-е сутки; б – 3-и сутки; в – 7-е сутки; г – 10-е сутки
Во всех отделах на всех сроках исследования архитектоника сетчатки была сохранна: отсутствовали деструктивные изменения, не выявлено каких-либо признаков повреждения фоторецепторов, стратификация слоев не нарушена, пролиферативных изменений не отмечен о. Изменений в ДЗН и центральных сосудах сетчатки не наблюдали. Сосудистая оболочка прилежала на всем протяжении, отека не выявлено, отслойки цилиарного тела обнаружено не было. Ни в одном случае не визуализировали клеточные трансплантаты в витреальной полости. Во всех опытных глазах и в глазах контрольной группы на всем протяжении эксперимента внутриглазные структуры имели нормальное строение без каких-либо значимых патологических морфологических изменений.
В 1-е сутки после проведения хирургического вмешательства на всех глазах опытных групп субретинально обнаруживали округлые конгломераты диаметром 50-80 мкм, адгезированные к нативному РПЭ кроликов-реципиентов – предположительно 3D сфероиды РПЭ. Адгезия 3D сфероидов РПЭ является признаком жизнеспособности клеточных трансплантатов. Также отмечали утолщение сетчатки, что являлось естественной патофизиологической реакцией в ответ на операционную травму. В контрольной группе также визуализировали утолщение сетчатки.
На 3-и сутки на всех глазах опытных групп также субретинально были обнаружены 3D сфероиды РПЭ, адгезированные к нативному РПЭ и имеющие тенденцию к уплощению, что свидетельствует о начале процесса спрединга. Утолщение сетчатки по-прежнему сохранялось во всех группах.
На 7-е сутки на всех глазах опытных групп субретинально визуализировали уплощенные трансплантаты, адгезированные к РПЭ реципиентов и образующие новый клеточный слой, что свидетельствует о продолжении процесса спрединга. Толщина сетчатки в опытных и контрольной группах уменьшалась.
На 10-е сутки на всех глазах опытных групп субретинально визуализировали клеточный слой РПЭ, толщина сетчатки в опытных и контрольной группах была объективно меньше, чем на предыдущие сутки наблюдения.
На 14-е сутки на всех глазах опытных и контрольной групп сетчатка выглядела интактно, утолщения и дегенеративных изменений фоторецепторов не было обнаружено, отмечалось прилегание к сосудистой оболочке. Между сетчаткой и хориоидеей визуализировался монослой РПЭ. В последующие сроки наблюдения морфологическая картина внутриглазных структур кроликов была стабильна.
Таким образом, в ходе проведения гистологического исследования, было показано, что сфероиды РПЭ, трансплантируемые субретинально по предложенной технологии, являются жизнеспособными, так как адгезируются к нативному РПЭ кроликов-реципиентов и по мере увеличения сроков наблюдения распластываются, что способствует образованию нового клеточного слоя РПЭ. Также, ни в одном случае не было обнаружено 3D сфероидов в витреальной полости, что свидетельствует о том, что клеточные трансплантаты не диссеминируют в витреальную полость. Отсутствие структурных нарушений со стороны оболочек глаза и его внутренних сред на микроскопическом уровне подтвердило безопасность субретинальной трансплантации РПЭ в форме 3D клеточных сфероидов.
