Рис. 3 – Электрофореграммы результатов исследования маркера CTG в образцах пациентов с ДФ (1 – 10, 20 – 29).
Таблица 6 – Результаты генотипирования по тестируемым маркерам гена TCF4
Маркер TCF1
С ДНК пациентов c ДФ и праймерами TCF4-F/R1 были поставлены ПЦР. В результате анализа хроматограмм были найдены мутации в одной аллели у 52 -х пациентов и в двух аллелях у 21-го пациента из 78-ми генотипированных. Таким образом, частота встречаемости мутаций в маркере TCF1 в исследуемой когорте составила 66,67% и 26,92%, соответственно. Приведенные значения обобщены в табл. 24.
Маркер TCF2
С ДНК пациентов с ДФ и праймерами TCF4-F/R2 были поставлены ПЦР. В результате анализа хроматограмм были найдены мутации в одной аллели у 10-ти пациентов из 78-ми, гомозиготных мутаций найдено не было. Таким образом, частота встречаемости мутаций в маркере TCF2 в исследуемой когорте составила 12,8%. Приведенные значения обобщены в табл. 6.
Тринуклеотидные повторы CTG18.1
С ДНК пациентов с ДФ и праймерами CTG-F/R2 были поставлены ПЦР. Продукты ПЦР были тщательно разделены по длинам с помощью электрофореза в агарозном геле. На рис. 3 приведена электрофореграмма результатов исследования длины тринуклеотидных повторов. Всего было обнаружено два пациента с двумя экспансированными аллелями. 21 пациент имел хотя бы одну экспансированную аллель тринукеотидных повторов. Частота встречаемости биаллельной экспансии была равна 2,56%, частота моноаллельной экспансии -26,92%. Приведенные значения обобщены в табл. 6. «М» - маркер молекулярного веса ДНК.
В качестве критерия отбора образцов на дальнейшее генотипирование по маркерам SLC1-4, LOX, AGB1-2 было выбрано отсутствие экспансии тринуклеотидных повторов (55 образцов). Так как по литературным данным маркер тринуклеотидных повторов имеет наибольший OR (32,3), у пациентов, несущих хотя бы одну аллель экспансированных повторов.
Результаты генотипирования образцов пациентов с ранней и поздней дистрофией Фукса не показали наличие мутаций по маркерам SLC1-4, LOX, AGB1-2 ни в одном образце.
Таким образом, все 78 образцов крови пациентов с ДФ были генотипированы по маркерам TCF1, TCF2, и маркеру тринуклеотидных повторов CTG.
Стоит отметить, что у пациентов с ранним типом ДФ часто встречались гомозиготные мутации по маркеру TCF1 (3 пациента из 4-х). Возможно, существует связь между возрастом манифестации заболевания и числом мутантных аллелей по маркеру TCF1: носители гомозиготной мутации могут развивать ДФ в более раннем возрасте, чем носители гетерозиготной мутации по данному маркеру.
Для всех пациентов из группы с поздней ДФ (74 образца) была найдена хотя бы одна мутация в маркере, ассоциированном с ДФ. Эти результаты превосходят рассчетные по литературным данным. При этом наблюдается закономерность: одна экспансированная аллель CTG18.1 может сочетаться с наличием мутации по маркеру TCF1, но вот наличие гомозиготной мутации хотя бы в одном из этих маркеров исключает наличие другой мутации из этой пары маркеров. Мутации по маркеру TCF2 чаще всего сопровождали гетерозиготную мутацию по маркеру TCF1. Только в одном случае отсутствовали мутации по маркерам CTG и TCF1, но была обнаружена мутация по маркеру TCF2.
По проведенному анализу полученных результатов, можно утверждать, что маркер TCF1 имеет наибольшую чуствительность (0,94), однако неизвестна его специфичность. Сочетание маркера TCF1 и маркера CTG повышает чувствительность до 0,99, а сочетание трех маркеров (TCF1, TCF2 и CTG) обеспечивает чувствительность, равную 1, что является очень высоким показателем для диагностических маркеров.
