5.2. Морфофункциональные изменения роговицы кролика после имплантации полимерного кератопротеза

     Целью данной части работы явилось изучение в экспериментально-морфологическом исследовании in vivo влияния разработанной новой модели кератопротеза, изготовленной из полимерного материала на основе гидрофобного акрила, на структуры переднего отрезка глаза экспериментального животного (кролика).

    Для достижения поставленной цели исследования были сформулированы и решены следующие задачи: оценить клинико-морфологические изменения глаза кролика при имплантации предложенной модели кератопротеза с разработанной опорной пластиной и изучить реакцию стромы роговицы кролика на имплантацию полимерной модели кератопротеза в раннем и отдаленном послеоперационном периодах.

    5.2.1. Результаты исследования роговицы кролика методом биомикроскопии

     На основании результатов экспериментально-морфологического исследования и математического моделирования ОПК была разработана новая модель кератопротеза компанией «Репер-НН» (г. Нижний Новгород). В данной модели радиус кривизны опорный пластины равен 8 мм. В центре опорной пластины оптический цилиндр с оптической силой 14,5 D, диаметром 4мм (d1), длина его наружной части 0, 1 мм (h1), внутренней – 0,05 мм (h2) (рисунок 44).

    Имплантацию кератопротеза выполняли 7 кроликам при общей анестезии (наркоз севараном), по вышеописанной методике во 2-ой главе ¹ . В послеоперационном периоде проводили терапию в виде инстилляций в конъюнктивальную полость растворов антибиотика (моксифлоксацин 0,5%) и стероида (дексаметазон 0,1%) 2 раза в день в течение 7 дней.

    Наблюдение проводили в сроки 1, 3, 7, 14, 30 и 90 дней с выполнением биомикроскопии и оптической когерентной томографии роговицы (Optovue, США). На сроке 90 дней животных выводили из эксперимента. Выкроенные корнеосклеральные диски помещали в 10% растворе забуференного нейтрального формалина (pH 7,4) на срок 24 часа, которые использовали для проведения световой микроскопии.

     В раннем послеоперационном периоде (срок до 7 суток) отмечали ответную реакцию со стороны тканей роговицы (отек стромы в области роговичного разреза, умеренная инъекция сосудов конъюнктивы), уменьшение которой происходило к 10 - 14 дню наблюдения. Во всех случаях положение кератопротеза соответствовало первоначальному.

    К 1-ому месяцу наблюдения во всех случаях наблюдали незначительное помутнение стромы роговицы вокруг кератопротеза (рисунок 45). В 1-м случае определяли истончение передних слоев стромы над оптической частью кератопротеза с язвенным дефектом (рисунок 46).

    Изменений глубжележащих сред (величина передней камеры глаза, прозрачность влаги передней камеры глаза, реакция зрачка на свет, прозрачность хрусталика, рефлекс глазного дна) не обнаружили.

    К трем месяцам наблюдения в указанном случае наблюдали сохранение язвенного дефекта стромы роговицы с последующей протрузией кератопротеза (рисунок 47). В остальных случаях (6 глаз) положение кератопротеза в интрастромальном кармане было стабильным. Помутнение стромы роговицы вокруг кератопротеза сохранялось в одном случае у 1-ого экспериментального животного (1 глаз).

     5.2.2. Результаты исследования роговицы кролика методом оптической когерентной томографии

    При проведении ОКТ на сроке 14 дней после имплантации кератопротеза во всех случаях в проекции ИСК визуализировали кератопротезы, равномерно располагающиеся в средних слоях стромы роговицы. При анализе данных ОКТ отмечали увеличение толщины роговицы в центральной оптической зоне, в сравнении с дооперационными данными к 14 суткам после операции в 6 случаях, что можно объяснить наличием в строме роговицы кератопротеза, при этом к 90 суткам наблюдения отек поверхностных слоев роговицы над оптическим цилиндром уменьшался (рисунок 48,49,50).

    К трем месяцам наблюдения при проведении ОКТ в выше описанном 1-м случае, с выявленным при биомикроскопии язвенным дефектом над оптической частью кератопротеза, визуализировали истончение слоев роговицы в центре оптической части кератопротеза (рисунок 51, 52).

    5.2.3. Результаты гистологического исследования роговицы кролика методом световой микроскопии

     При рассмотрении гистологических срезов роговиц экспериментальных животных на сроке наблюдения 3 месяца во всех случаях определяли наличие полости в строме центральных отделов с повторением контуров фигуры протеза по периферии и оптической части в центре с признаками умеренного капсулообразования. Капсула представлена рыхло расположенными коллагеновыми волокнами, фибробласты имеют различную степень дифференцировки, наблюдается умеренное количество активных клеток. Волокна стромы роговицы располагались упорядоченно, без видимых структурных изменений, при этом распределение волокон стромы ее передних слоев было более равномерное и соответствовало контурам фигуры протеза, по сравнению с задними слоями роговицы, где отмечено более рыхлое расположение волокон роговицы. Так же фиксировали изменение эпителия в области оптической части протеза, отмечается его десквамация и уплощение, связанное с высокой силой натяжения, возникающей в строме роговицы при имплантации протеза. Десцеметова мембрана и эндотелий были сохранены, выраженных изменений вследствие длительного нахождения протеза в строме роговицы кролика не отмечали (рисунок 53). Воспалительных явлений отмечено не было. Гистологическая картина полностью соответствовала клинической картине по данным биомикроскопии.

    На сроке 3-х месяцев после хирургического вмешательства в 1-м случае определяли гистологические признаки дефекта эпителия и стромы, наличие лимфоцитарного пластинчатого инфильтрата, что коррелировало с клинической картиной послеоперационного периода, вероятно формирование язвенного дефекта над оптическим цилиндром с локальным помутнением и последующим истончением и было обусловлено исходом воспалительного процесса (рисунок 54).

    В результате проведенного экспериментально-морфологического исследования in vivo было показано, что кератопротез занимал стабильное положение в сформированном интрастромальном кармане. При имплантации разработанной модели полимерного кератопротеза не было отмечено выраженной воспалительной реакции глаза кролика в большинстве случаев, визуализируемой биомикроскопически и гистологически.

     Таким образом, экспериментальное, клинико-морфологическое исследование in vivo новой модели кератопротеза, изготовленной из полимерного материала на основе гидрофобного акрила с опорной пластиной группы №1 показало, что при максимальном сроке наблюдения (до 3 месяцев) был отмечен 1 случай (12,5%) протрузии кератопротеза из 7. По данным световой микроскопии, установлено, что в большинстве случаев пребывание разработанного кератопротеза в роговице кролика в изученные сроки не вызывало видимых структурных изменений слоев роговицы, сохранялось равномерное распределение волокон стромы и соответствовало контурам модели протеза.

    

    ¹Исследования проводили в экспериментальной лаборатории Калужского филиала ФГАУ НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России (директор – д.м.н. Терещенко А.В.)