1 Общая характеристика группы клинического исследования
В исследуемую группу было включено 74 ребенка (101 глаз).
Условия включения в исследуемую группу:
• Дети с диагнозом: ретинопатия недоношенных, активная фаза, 4а, 4б, 5 стадия;
• Дети, ранее не подвергавшиеся оперативному вмешательству: швартэктомия или ленсшвартэктомия.
Условия исключения из исследуемой группы:
• Дети с диагнозом: ретинопатия недоношенных, активная фаза, 1, 2, 3 стадия;
• Дети с диагнозом: ретинопатия недоношенных, рубцовая фаза;
• Дети с диагнозом: ретинопатия недоношенных, активная фаза, афакия, авитрия (т.е. дети, ранее подвергнутые оперативному вмешательству -швартэктомия или ленсшвартэктомия);
• Дети, у которых состояние глаза с ретинопатией недоношенных не позволило осуществить забор исследуемого материала (гипотония глазного яблока, закрытая воронкообразная отслойка сетчатки с грубыми трансретинальными мембранами).
Согласно международной классификации РН [150] дети были распределены на 2 большие группы в зависимости от формы течения заболевания: классическая форма (рис. 10) и задняя агрессивная форма (рис. 11). Внутри каждой группы были сформированы подгруппы в зависимости от степени прогрессирования РН: при классической форме РН – это 4а стадия (рис. 12), 4б стадия (рис. 13), 5 стадия (рис. 14); при ЗАРН – это частичная отслойка сетчатки (рис. 15) и тотальная отслойка сетчатки (рис. 16).

Рис. 11. Задняя агрессивная форма ретинопатии недоношенных

Рис. 12. 4а стадия классической ретинопатии недоношенных
• тракционная отслойка сетчатки, более плоская в центральных отделах и более высокая на периферии – “воронкообразная отслойка” (рис. 17);
• экссудативная отслойка сетчатки, более высокая в центральных отделах и более низкая на периферии – “вулканообразная отслойка” (рис. 18).
Офтальмоскопические изменения у детей, включенных в исследование, представлены в таблице 3.
Гестационный возраст у детей исследуемой группы находился в интервале от 25 до 35 недель и в среднем составил 28,9 ± 0,3 недели.
Масса тела на момент рождения у детей исследуемой группы находилась в интервале от 635 до 2330 г и в среднем составила 1219 ± 47 г.

Рис. 13. 4б стадия классической ретинопатии недоношенных

Рис. 14. 5 стадия классической ретинопатии недоношенных
Сравнительный анализ гестационного возраста показал, что у детей, развивших в последствие классическую форму РН, срок гестации в подавляющем большинстве случаев (36%) составил 29-30 недель, а у детей, развивших в последствие заднюю агрессивную форму РН, средний гестационный возраст в 30% случаев составил 27-28 недель и в 30% случаев - 29-30 недель.
Сравнительный анализ массы тела на момент рождения показал, что дети с классической формой РН при рождении в 56% случаев имели низкую массу тела (1000 – 1500 г). У детей с ЗАРН в большинстве случаев (37%) была зарегистрирована экстремально низкая масса тела (< 1000 г).
Анализ сопутствующей патологии показал, что у детей, развивших более тяжелую форму ретинопатии недоношенных (ЗАРН), в достоверно большем числе случаев выявлялась внутриутробная инфекция (76,7%), перинатальное постгипоксическое поражение ЦНС по типу гипоксически-ишемического (53,5%) и ишемически-геморрагического поражения (25,6%), внутрижелудочковых кровоизлияний (ВЖК) различных степеней тяжести (44%). В 53,5% случаев у детей с ЗАРН был зарегистрирован синдром дыхательных расстройств (СДР), повлекший за собой более частое проведение ИВЛ (79%).
Все дети, включенные в исследование, поступили в клинику для проведения витреальной хирургии. Предварительная лазеркоагуляция сетчатки у детей с ЗАРН была проведена в 51% случаев (22 чел), у детей с классической РН – в 35% случаев (11 чел).
Сравнительная характеристика детей с классической и задней агрессивной формой РН представлена в таблице 4.
2 Методика клинического обследования детей
Все дети с ретинопатией недоношенных прошли стандартное офтальмологическое обследование:
• осмотр переднего отрезка глаза (биомикроскопия): осуществлялся с помощью ручной щелевой лампы, модель “SL-15” (фирма Kowa, Япония). При осмотре оценивали состояние конъюнктивы и склеры, прозрачность роговицы, глубину передней камеры и состояние ее влаги, радужку, центрацию зрачка, его диаметр и форму, зрачковые фотореакции, наличие пупиллярной мембраны, прозрачность глубоких оптических сред;
• непрямая (обратная) офтальмоскопия: проводилась по общепринятой методике на фоне циклоплегии 0,1% раствором атропина с помощью налобного бинокулярного офтальмоскопа (фирма Hеine, Германия) и широкофокусных асферических линз 20D и 28D. Оценивали состояние сетчатки, ширину аваскулярной зоны, цвет, форму, границы, размеры диска зрительного нерва, калибр и ход сосудов в центре и на периферии, наличие демаркационного вала, экссудативные/пролиферативные изменения;
• цифровое сканирование глазного дна: осуществлялось с использованием ретинальной педиатрической камеры “RetCam-120” (корпорация Massie Research Laboratories, США). После инстилляции 0,4% раствора инокаина устанавливались мягкие векорасширители для недоношенных, на передний отрезок глаза наносился гель «Видисик», после чего на роговицу помещалась линза прибора, предназначенная для осмотра глазного дна у недоношенных детей (угол обзора 130 о ). Данный метод применялся с целью объективного документирования клинической картины глазного дна у недоношенных детей;
• ультразвуковое исследование глазного яблока (эхография): проводилось на аппарате “Compact Touch” (фирма Quantel Medical, Франция) с частотой датчика B-сканирования 10 МГц, сектор обзора 50°. Перед началом исследования на датчик наносилось небольшое количество геля, обеспечивающего контакт датчика с глазом ребенка. B-сканирование (эхография) проводилось транскутанно с помощью установки датчика на веки. При этом прикладываемое давление к датчику было минимальным во избежание окуло-висцеральных рефлексов. При проведении исследования производилась оценка прозрачности глубоких оптических сред, а также состояния оболочек глазного яблока.
3 Техника оперативного вмешательства и забора клинического материала

Рис. 17. Воронкообразная (тракционная) отслойка сетчатки при ЗАРН

Рис. 18. Вулканообразная (экссудативная) отслойка сетчатки при ЗАРН
Оперативное вмешательство осуществлялось в несколько этапов: I этап: установка трех портов 25G через плоскую часть цилиарного тела (в 4-5 мм от лимба) в витреальную полость (рис. 20).
Визуализация глазного дна осуществлялась с помощью световода, поддержание внутриглазного давления - с помощью системы ирригации, по которой подавался физиологический раствор (рис. 21).
II этап: забор проб стекловидного тела для исследования.

Рис. 19. Оперативное вмешательство по поводу ретинопатии недоношенных

Рис. 20. Установка портов 25G через плоскую часть цилиарного тела
III этап: субтотальная витреоэктомия с помощью витреотома (рис. 24).
IV этап: швартэктомия (рис. 25-26). С помощью микрохирургических офтальмологических инструментов (витреотом, пинцет, ножницы) производится рассечение и удаление эпи- и трансретинальных мембран (шварт), оказывающих тракционное действие на сетчатку.
V этап: удаление портов 25G, завершение операции (рис. 27).
Всем детям с ретинопатией недоношенных 4а, 4б стадий проводилась швартэктомия, детям с ретинопатией 5 стадии проводилась ленсшвартэктомия. Отличие этой операции состояло в том, что перед этапом субтотальной витреоэктомии с помощью витреотома производилась аспирация хрусталиковых масс (рис. 28-29).
Для мониторирования уровня насыщения крови кислородом до, во время и после оперативного вмешательства у детей с ретинопатией недоношенных производился забор капиллярной крови из пятки. Для этого из предварительно согретой пятки недоношенного ребенка, на медиальной поверхности ее подошвенной части с помощью специального пяточного ланцета (рис. 30) с размером лезвия 0,85 мм х 1,75 мм производился прокол кожи на глубину около 1,5 мм. Полученная кровь без грубых физических воздействий свободно поступала в стеклянный капилляр объемом 0,125 мл.
4 Лабораторный анализ клинического материала
А) С помощью газоанализаторов Radiometer ABL800 FLEX и Radiometer ABL700 SERIES (рис. 31-32) производился анализ кислотно-основного состояния стекловидного тела и капиллярной крови, который включал в себя определение ряда показателей:
1. рН (водородный показатель) – отрицательный десятичный логарифм активности ионов водорода в растворе, количественная характеристика кислотности водных растворов. Определяется по формуле Гендерсона-Гассельбаха, без доступа воздуха при температуре 37°С, измеряется в единицах:
Метод измерения – потенциометрический, используется стеклянный ионселективный электрод.
Нормативы:
По данным Whikehart D.R. (2003) в норме рН стекловидного тела колеблется от 7,4-7,5 [193]. По данным Малышева В.Д. (2005) в норме рН артериальной крови колеблется от 7,35 до 7,45 [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
Смещение значения pH <7,35 означает развитие ацидоза (уменьшение pH - закисление среды). Может быть связан как с уменьшением содержания бикарбонатов (метаболический ацидоз), так и с увеличением содержания углекислого газа (респираторный ацидоз).
Смещение значения pH >7,45 означает развитие алкалоза (увеличение pH - защелачивание среды). Может быть связан как с увеличением содержания бикарбонатов (метаболический алкалоз), так и с уменьшением содержания углекислого газа (респираторный алкалоз).
2. pCO2 (парциальное давление углекислого газа) – давление CO2 в газовой смеси, находящейся в равновесии с плазмой артериальной крови при температуре 37°С, единицы измерения – мм.рт.ст.

Рис. 22. Аспирация стекловидного тела в систему витреотома с последующим переливанием в стерильный капилляр

Рис. 23. Аспирация стекловидного тела в систему витреотома с последующим переливанием в стерильный капилляр
Нормативы:
По данным Глинчука Я.И. (1987) в норме pCO2 стекловидного тела составляет 47 ± 1,7 мм.рт.ст. [21].
По данным Малышева В.Д. (2005) в норме pCO2 крови составляет 40 мм рт. ст. с колебаниями от 35 до 45 мм рт. ст. [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
Отклонение величины pCO2 крови < 35 мм.рт.ст. означает развитие гипокапнии (пониженное содержание углекислого газа в крови, обычно возникает на фоне гипервентиляции).
Отклонение величины pCO2 крови > 45 мм.рт.ст. означает развитие гиперкапнии (повышенное содержание углекислого газа в крови, обычно возникает на фоне гиповентиляции).
Показатель pCO2 является дыхательным компонентом кислотно-основного состояния крови.
3. HCO3- актуальное содержание бикарбоната, рассчитанное при истинном pCO2 и истинном насыщении крови кислородом, единицы измерения – ммоль/л;

Рис. 24. Субтотальная витреоэктомия (стрелками указано фиброзно-измененное стекловидное тело, аспирируемое витреотомом)

Рис. 25. Эпи- и трансретинальные шварты. Эпи- и трансретинальные шварты
Бикарбонаты характеризуют бикарбонатную буферную систему стекловидного тела/крови.
Нормативы:
По данным Whikehart D.R. (2003) в норме содержание бикарбонатов в стекловидном теле составляет 25 ммоль/л [193].
По данным Малышева В.Д. (2005) в норме содержание бикарбонатов в крови – 24 ± 2,0 ммоль/л [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
Уменьшение содержание бикарбонатов в крови указывает на развитие метаболического ацидоза (pH <7,35), увеличение содержания бикарбонатов в крови указывает на развитие метаболического алкалоза (pH >7,45).
Показатель HCO3- -является метаболическим компонентом кислотно-основного состояния крови.
4. BE (истинный избыток/дефицит буферных оснований) - величина расчетная, отражает количество сильного основания или кислоты, необходимой для того, чтобы привести рН биологической жидкости к значению 7,4 при температуре 37 °C, pCO2 40 мм.рт.ст.; единицы измерения – ммоль/л.
В основе расчета лежит номограмма Siggaard-Andersen, модифицированная разработчиками программного обеспечения для автоматических анализаторов фирмы Radiometer.
Нормативы:
По данным Малышева В.Д. (2005) у здоровых лиц ВЕ = 0, допустимые пределы колебаний ± 2,3 ммоль/л [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
Этот показатель указывает на смещение концентрации титруемых буферных оснований по отношению к норме в стандартных условиях. Положительное значение указывает на излишек оснований или дефицит кислот, а отрицательное на дефицит оснований или избыток кислот.
Б) На газоанализаторах Radiometer ABL800 FLEX и Radiometer ABL700 SERIES также проводился анализ парциального давления кислорода (pO2 ) в образцах стекловидного тела и капиллярной крови.
pO2 (парциальное давление кислорода) – давление O2 в газовой смеси, находящейся в равновесии с плазмой артериальной крови при температуре 37 °C, единицы измерения – мм.рт.ст.
Парциальное давление кислорода измеряется амперометрическим методом с помощью мембранных платиновых электродов (типа Clark). Кончик электрода для определения pO2 с платиновым катодом и серебряным анодом окружен раствором электролита и покрыт полупроницаемой тефлоновой мембраной. Батарея в усилителе подает постоянное поляризационное напряжение на платиновый катод. Когда электрод помещается в исследуемую пробу, молекулы кислорода, проходя через мембрану, оседают на катоде и возникает поляризационный ток. Этот ток усиливается электрометрическим усилителем, где индикатором служит стрелочный прибор, градуированный в миллиметрах ртутного столба. Ток восстановления кислорода пропорционален концентрации растворенного кислорода.
Нормативы:
По данным Глинчука Я.И. (1987) в норме pO2 стекловидного тела составляет 46 ± 6 мм.рт.ст. [21].
По данным Фомичева М.В. (2002) в норме pO2 капиллярной крови у новорожденных колеблется от 40 до 60 мм.рт.ст. [105].
Интерпретация отклонений от нормы:
Отклонение величины pO2 крови > 100 мм.рт.ст. означает развитие гипероксии (повышенное содержание кислорода в крови, обычно возникает в результате избыточного поступления кислорода в организм).
Отклонение величины pO2 крови < 60 мм.рт.ст. при сатурации кислорода (SatO2 ) < 90% означает развитие гипоксемии (пониженное содержание кислорода в крови, обычно возникает в результате пониженного содержания кислорода во вдыхаемом воздухе, альвеолярной гиповентиляции, циркуляторных нарушений или шунтирования крови).
В) При анализе электролитного состава стекловидного тела учитывались суммарные концентрации ионов калия (K + ), натрия (Na+ ) и хлора (Cl -).
Встроенный электролитный анализатор измерял концентрации указанных ионов. По принципу работы анализатор относится к рН-иономеру и основан на измерении разности потенциалов между ионоселективными электродами и электродом сравнения и расчете концентрации ионов в соответствии с градуировочными характеристиками. Принцип работы прибора основан на калибровке по двум точкам. В качестве таких «точек» выступают два раствора (Калибратор 1 и Калибратор 2), в которых заранее заданы значения концентрации ионов K + , Na+ и Cl -.
Также был рассчитан такой параметр, как анионная разница (АР), представляющая собой алгебраическую разность между концентрациями положительных ионов (катионов) и отрицательных ионов (анионов): АР = (Na+ + K + ) - (Cl -+ HCO3-)
Нормативы:

Рис. 30. Пункция пятки недоношенного ребенка с помощью пяточного ланцета

Рис. 31. Анализ проб стекловидного тела на газоанализаторе Radiometer ABL800 FLEX
По данным Малышева В.Д. (2005) в норме в капиллярной крови у новорожденных содержание Na+ составляет 136-145 ммоль/л, K + - 4,1 – 5, 3 ммоль/л, Cl -- 98-107 ммоль/л [52].
По данным Малышева В.Д. (2005) показатель АР в норме составляет от 8 до 16 мЭкв/л [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
• Натрий:
Повышение уровня натрия в крови указывает на развитие гипернатриемии (обычно на фоне обезвоживания, гиперфункции коры надпочечников, несахарном диабете, избыточном потреблении соли с пищей и т.п.);
Понижение уровня натрия в крови означает развитие гипонатриемии (на фоне гипергидроза, выраженной одышки, рвоты/диареи, лихорадки, сахарном диабете, гипотиреозе и т.п.);
• Калий:
Повышение уровня калия в крови указывает на развитие гиперкалиемии (обычно на фоне гемолиза клеток, судорог, тяжелых ожогов, острой почечной/надпочечниковой недостаточности, обезвоживания, щока и т.п.);
Дефицит калия в крови указывает на развитие гипокалиемии (на фоне продолжительной рвоты/диареи, почечной недостаточности, гиперфункции коры надпочечников, ацидозе, длительном голодании и т.п.);
• Хлор:

Рис. 32. Анализ проб стекловидного тела на газоанализаторе Radiometer ABL800 FLEX

Таблица 3 Офтальмоскопическая характеристика детей, включенных в исследование
Снижение уровня хлора в крови – гипохлоремия (обычно при усиленном потоотделении, диарее, рвоте, почечной недостаточности и т.п.).
• Анионная разница:
Высокая АР при ацидозе означает развитие нормохлоремического ацидоза или лактат-ацидоза (обычно при сепсисе, шоке, при парентеральном питании, острой/хронической почечной недостаточности, канальцевой патологии почек и т.п.);
Нормальная АР при ацидозе означает развитие гиперхлоремического ацидоза (обычно на фоне потери бикарбонатов с диареей, билиарной/панкреатической фистулой, через почки у недоношенных детей, избыточном поступлении хлоридов извне и т.п.).
Г) Для анализа метаболической активности стекловидного тела и сетчатки было проведено определение содержания в стекловидном теле глюкозы (как субстрата для биохимических реакций) и молочной кислоты или лактата (как конечного продукта утилизации глюкозы). Косвенно об уровне метаболических реакций свидетельствует такой показатель, как pCO2 , т.к. углекислый газ также является одним из конечных продуктов утилизации глюкозы. Однако, в большей степени, он свидетельствует о состоянии буферной системы стекловидного тела, т.к. является непосредственной ее частью. Поэтому для интерпретации метаболического состава стекловидного тела этот показатель не учитывался.
Встроенный глюкозиметр определяет уровень концентрации глюкозы, лактометр - уровень концентрации лактата. Метод измерения электрохимический: химические вещества тест-полоски вступают в реакцию с глюкозой/лактатом исследуемой жидкости. Это приводит к изменению сопротивления электрической цепи прибора, которое улавливается специаль-ными датчиками.
Нормативы:
По данным Hockwin O. (1976) в норме в стекловидном теле содержание глюкозы составляет 2,7 ммоль/л [192]. По данным Janet C. Rucker (2003) содержание лактата в норме в стекловидном теле составляет 7,8 ммоль/л [171].
По данным Малышева В.Д. (2005) в крови у новорожденных уровень глюкозы колеблется от 2,8 до 4,4 ммоль/л, а уровень лактата допустим до 1,6 ммоль/л [52].
Интерпретация отклонений от нормы:
Снижение уровня глюкозы в крови означает развитие гипогликемии (обычно при длительном голодании, некоторых наследственных нарушениях обмена веществ, опухолях гипофиза и поджелудочной железы, гепатитах, хронической почечной/надпочечниковая недостаточности и т.п.).
Повышение уровня глюкозы в крови означает развитие гипергликемии (при употреблении большого количества сахара в пищу, при сахарном диабете, гиперфункции коры надпочечников, обильной кровопотере, хроническом стрессе, тяжелых инфекционных заболеваниях и т.п.).
Снижение уровня лактата в крови обычно возникает при анемиях, снижении печеночного метаболизма и резкой потере массы тела. Повышение уровня лактата в крови означает развитие лактатацидоза (обычно при интоксикациях, острой почечной недостаточности, гипервентиляции, шоковых состояниях, сахарном диабете, гипоксии, тяжелых инфекционных заболеваниях, сепсисе и т.п.).