Результаты экспериментальных исследований введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой у крыс

     Целью второй серии основного этапа экспериментального исследования явилось изучение регенеративных процессов в тканях глаза опытных животных, в частности фибробластических реакций в интактной склере, с применением в том числе иммуногистохимических методов исследования.




    Задача данной главы:




    Изучить морфологические механизмы регенеративных процессов в тканях глаза опытных животных при имплантации нанодисперсной плаценты.




     Во второй серии основного этапа исследования для оценки степени репаративной активности тканей глазного яблока производили экспериментальные исследования на крысах (n = 80, 160 глаз). Как уже было отмечено ранее, животных также делили на четыре группы (по аналогии с кроликами). В первой опытной группе под конъюнктиву на склеру глаза крысы вводили биомплантат с нанодисперсной плацентой. Во второй опытной группе вводился биомплантат с крупнодисперсной плацентой. В первой контрольной группе под конъюнктиву на склеру глаза крысы имплантировали фрагмент отрезка сосуда пуповины без наполнения его плацентой. Вторая контрольная группа животных – ложнооперированные.




    Морфологические исследования производили через 3, 7, 30 и 60 суток после манипуляций.




     5.1.1 Клиническая оценка введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в эксперименте




    Отмечено, что послеоперационный период у крыс всех четырех исследуемых групп (обеих как опытных, так и контрольных) протекал без видимых осложнений (n = 80, 160 глаз).




    На 3-и сутки эксперимента наблюдалось в единичных случаях незначительное слизисто-гнойное отделяемое в первых опытных и во второй контрольной группе животных из конъюнктивального мешка глаза животных (n = 11), которое в последующие сроки исчезало. У животных второй контрольной группы (ложнооперированных) отделяемого не отмечено.




     На 3-и сутки исследования наблюдалась умеренная смешанная инъекция конъюнктивы глазного яблока животного в зоне оперативного вмешательства, интенсиность которой уменьшалась в зависимости от удаленности от места введения биоимплантата. Степень инъекции исчезала к 30-м суткам эксперимента. У животных второй контрольной группы (ложнооперированных) инъекция глазного яблока была незначительная и заканчивалась на 7-е сутки исследования.




    В ранние сроки введения (3-7-е сутки) в первых опытных и во второй контрольной группе животных отмечалось выстояние биоимплантата с приподнятой над ним слизистой оболочкой над склерой опытного глаза животного на 0,5-1,0 мм в сравнении со слизистой с противоположной стороны глаза. При этом отмечалось полнокровие эписклеральных сосудов в зоне введения изделия. Степень выстояния уменьшалась по мере рассасывания вводимого биоимплантата и нивелировалась к концу экспериментального исследования, также исчезало полнокровие приближённых к месту введения эписклеральных сосудов. Степень выраженности таких реакций в первой контрольной группе была ниже, чем у животных первых двух опытных групп.




     Отёк слизистой оболочки наблюдался локально только в зоне введения изделия в ранние сроки исследования 3-7-е сутки, затем отёк слизистой исчезал. У ложнооперированных животных отёка конъюнктивы не наблюдалось.




     Роговица у всех животных была прозрачная (n = 80), влага передней кмеры также была прозрачной без примеси каких-либо элементов. Отёка стромы радужки и задних синехий ни в одном случае отмечено не было. Офтальмоскопия глазного дна показала наличие прозрачности оптических сред у всех опытных животных (n = 80), при этом какой-либо патологии в виде гиперимии диска зрительного нерва, полнокровия сосудов глазного дна, кровоизлияний в сетчатку или в стекловидное тело отмечено не было.




    5.1.2 Морфологические исследования степени репаративной активности тканей глазного яблока крысы в зоне введения биомплантата с нанодисперсной плацентой




     В ранние сроки после имплантации (на 3-и сутки) во второй контрольной группе животных наблюдались проявления умеренного асептического воспаления. Выявлялись небольшие группы и отдельные клетки лимфоидного и моноцитарно-макрофагического ряда, умеренно расширенные микрососуды. Признаки асептического воспаления с проявлениями моноцитарно-макрофагического ответа соединительной ткани реципиента в зоне имплантации были более выражены в обеих опытных группах и в первой контрольной. Оболочка биоимплантата в обеих опытных группах сохранялась в виде волокнистой бесклеточной структуры так же, как и во второй контрольной группе при имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины. Однако в первой опытной группе отмечалась умеренная воспалительная инфильтрация стенки биоимплантата, чего не обнаруживалось во второй опытной группе при введении изделия с крупнодисперсной плацентой. В окружающей конъюнктиве лейкоцитарные реакции были более выражены в первой опытной группе, с преобладающими умеренными нейтрофильно-клеточными реакциями. Лимфоциты, единичные эозинофилы преобладали в участках, удаленных на 150-200 мкм от стенки имплантата. Прилегающий участок склеры реципиента в первой опытной группе характеризовался разрыхлением стромы, между коллагеновыми волокнами которой видны нейтрофилы и лимфоциты, а также мелкие полихромно окрашенные пылевидные частицы, аналогичные наблюдаемые при исследовании гистологического среза биоимплантата. Такие же частицы – агломераты находились внутри, в полости биоимплантата между клетками инфильтрата, а также в толще стенки и между окружающих изделие клеточных элементов. При этом АСМ-методом отмечено сохранение наноразмерной структуры измельчённой плаценты 40-100 нм (по аналогии с первым этапом исследования на кроликах). По периферии клеточного инфильтрата в конъюнктиве, а также в подлежащей зоне имплантации в склере регистрировалось полнокровие и расширение сосудов. Во второй опытной группе при введении биоимплантата в просвете изделия четко регистрировалась сиреневая масса из крупноразмерных частиц. Разволокнение поверхностных слоев склеры было менее выражено по сравнению с первой опытной группой. В обеих контрольных группах прилежащая склера сохранялась интактной.




     К концу 7-ых суток после манипуляции у животных второй контрольной группы наблюдались признаки ранней реэпителизации раневой зоны. Лейкоциты и макрофаги выявлялись как единичные клетки. Распределение и структура сосудов микроциркуляторного русла на светооптическом уровне была близка к таковой на удаленных участках конъюнктивы и склеры. Зона повреждения была заметна в виде умеренной деструкции в месте непосредственного оперативного воздействия (Рисунок 115). В первой контрольной группе вокруг имплантированного фрагмента отрезка сосуда пуповины наблюдался более выраженный клеточный ответ конъюнктивы, проявляющийся в умеренном количестве моноцитарно -макрофагальных элементов (Рисунок 116). Во всех группах экспериментальных животных поверхностные участки конъюнктивы подвергались процессам начальным реэпителизации раневой поверхности. К рассматриваемому сроку усиливались инфильтративно-эксудативные процессы в участках тканей как донора, так и реципиента, непосредственно примыкающих к зоне имплантации. Это проявлялось в лимфоцитарно-моноцитарных клеточных ответах, умеренной инфильтрации мононуклеарами тканей прилежащей склеры и конъюнктивы, появлении отдельных лейкоцитов в оболочке и в содержимом биоимплантата (Рисунок 117). Оболочка биоимплантата была утолщена, отечна. Аналогичные проявления выявлялись в межклеточном веществе склеры. Наряду с лейкоцитарно-клеточными реакциями, наблюдались пролиферативно-фибробластические ответы. Фибробласты формировали обильные клеточные тяжи, разделенные нежными волокнистыми структурами. Можно было видеть значительное число микрососудов. У животных второй опытной группы проявления асептических экссудативно-клеточных реакций были менее выражены, при этом близки по характеру ответов к таковым у опытных животных первой группы. Плацентарный клеточный материал при этом не проявлял признаков диффузионно-дисперсионных изменений, сохраняя при этом предшествующую локализацию и размерность в биоимплантата (Рисунок 118).




     Иммуногистохимическое исследование с определением моноклональных антител с экспрессией к белку Ki-67 ПАП-методом на 7-е сутки эксперимента показало выраженную пролиферативную активность клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глазного яблока крысы вокруг биоимплантата (Рисунок 119, Рисунок 120) в первой опытной группе. Во второй опытной группе в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой (Рисунок 121), как и в первой контрольной группе при введении фрагмента отрезка сосуда пуповины (Рисунок 122), наблюдалась умеренно-выраженная пролиферативная активность. Низкую пролиферативную активность отмечали в зоне разреза конъюнктивы во второй контрольной группе (Рисунок 123).




    Иммуногистохимическое исследование с определением моноклональных антител с экспрессией к белку Caspase-3 ПАП-методом на 7-е сутки показало высокий уровень апоптоза клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глаза вокруг введённого биоимплантата с нанодисперсной плацентой (Рисунок 124) в первой опытной группе. Наблюдалась умеренно-выраженная апоптотическая активность в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой во второй опытной группе (Рисунок 125), так же, как и при имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины в первой контрольной группе (Рисунок 126). Низкий уровень апоптозов отмечался в зоне разреза конъюнктивы во второй контрольной группе (Рисунок 127). На 30-е сутки после проведённой манипуляции у контрольных и опытных животных зона наружной поверхности раневого повреждения подвергалась полной реэпителизации. Во второй контрольной группе на месте хирургического вмешательства формировался рубец в виде ограниченного участка плотной волокнистой соединительной ткани с сетевидно распределенными коллагеновыми волокнами. Лейкоцитарно-клеточные реакции и зоне манипуляции и непосредственно вокруг повреждения у животных второй контрольной группы отсутствовали.




     Коллагеновые волокна прилежащей склеры во второй контрольной группе, в первой контрольной группе и во второй опытной группе визуально морфологически близки. При их исследовании с помощью АСМ-методом коллагеновые волокна в склере располагались достаточно плотно и упорядоченно. Микрофибриллы были плотно упакованы, отслеживалась их направленность по ходу пучков коллагеновых волокон. Между скоплениями волокнистого каркаса межклеточного вещества отслеживались отросчатые клетки по строению, соответствующие фибробластам. Толщина и структура волокон имели близкие жёсткостные и поверхностные структурные характеристики как в поперечном, так и продольном направлении. Между пучками волокон имелось значительное количество «перемычек».




    Волокнистый компонент межклеточного вещества был разделен незначительным объёмом аморфного компонента межклеточного вещества (Рисунок 128).




     При гистологическом анализе в данные сроки стенка фрагмента отрезка сосуда пуповины в первой контрольной группе и оболочка биоимплантата во второй опытной группе в значительной степени сохранялись. В то время как в первой опытной группе она подвергалась значительной степени разрушения в виде её разволокнения, иммиграции в её толщу мононуклеаров, клеток фибробластического ряда, микрососудов. В непосредственном окружении и в оболочке биоимплантата у животных первой опытной группы были видны многочисленные превазиды в виде эндотелиально-клеточных тяжей, что указывало на активацию процессов репаративного ангиогенеза. В непосредственном окружении биоимплантата у животных первой опытной группы наблюдались значительные клеточные скопления, включающие лимфоциты, пролиферирующие и зрелые клетки фибробластического ряда, эпителиоидные клетки. Фибробласты формировали тонкую соединительнотканную капсулу вокруг биоимплантата с множеством гемокапиляров и наличием эпителиоидных клеток. При исследовании АСМ-методом в первой опытной группе в участках склеры, непосредственно прилежащей к зоне исследовании, выявлялись признаки существенной динамики. Волокнистый компонент терял упорядоченную организацию и приобретал микрофибриллярную «войлокообразную» организацию неупорядоченно лежащих структур (Рисунок 129).




    Пучки волокон наблюдались утолщенными, набухшими. В аморфном матриксе нередко прослеживались скопления «гранул» по форме и размерности соответствующие агломератам нанодисперсной плаценты. Кроме того, выявлено, что во второй опытной группе на 30-е сутки после проведённых манипуляций в склере инфильтрата практически не наблюдалось, также не наблюдалось его в обеих контрольных группах. Отмечалось только небольшое разволокнение волокон стромы с наружной стороны. В окружении донорских тканей и непосредственно в них выявлялось значительное число гемокапиляров, но проявления ангиогенеза были менее выражены. Склера была практически интактной во второй опытной группе уже на удалении 200 – 300 мкм.




     При иммуногистохимическом исследование с определением экспрессии Ki-67 ПАП-методом на 30-е сутки эксперимента выявлено, что сохранялась выраженная пролиферативная активность клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глазного яблока вокруг введённого биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой опытной группе (Рисунок 130). Умеренно-выраженная пролиферативная активность наблюдалась в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой во второй опытной группе экспериментальных животных (Рисунок 131).




    Умеренная пролиферативная активность была отмечена в зоне имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины в первой контрольной группе (Рисунок 132) и практически она отсутствовала в зоне разреза конъюнктивы во второй контрольной группе (Рисунок 133). Полученные данные пролиферативной активности клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глаза животного в ответ на хирургическую манипуляцию по группам исследования согласуются с результатами наблюдения предыдущего срока эксперимента.




     На 30-е сутки методом иммуногистохимического анализа с применением моноклонального антитела к белку Ki-67 была исследована сетчатка глаза крысы под зоной введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой контрольной группой по аналогии с кроликами, в данный период у которых обнаруживался флуоресцентной микроскопией материал плацентарной природы в сетчатке глаза (Рисунок 134). Признаков пролиферативной активности обнаружено не было как на поверхности сетчатки в виде эпиретинальных фиброзных изменений, так и под сетчаткой в виде разрастаний новых фибро-васкулярных мембран.




    При иммуногистохимическом исследовании с определением экспрессии Caspase-3 ПАП-методом на 30-е сутки был выявлен достаточно высокий уровень апоптоза клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глазного яблока вокруг введённого биоимплантата с нанодисперсной плацентой (Рисунок 135) в первой опытной группе. Отмечена низкая апоптотическая активность в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой (Рисунок 136), единичная апоптотическая активность в зоне имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины в первой контрольной группе (Рисунок 137) и практически отсутствие апоптозов в зоне разреза конъюнктивы во второй контрольной группе (Рисунок 138).




    На 30-е сутки методом иммуногистохимического анализа с применением моноклонального антитела к белку Caspasa-3 была исследована сетчатка глаза крысы под зоной введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой контрольной группе по аналогии с кроликами, в данный период у которых обнаруживался флуоресцентной микроскопией материал плацентарной природы в сетчатке глаза (Рисунок 139). Признаков апоптотической активности обнаружено не было.




     Отсюда следует, что на 30-е сутки отличительной особенностью реакций у животных первой опытной группы являлись более выраженные проявления васкулогенеза и коллагеногенеза в зонах как непосредственно прилежащих к биомплантату, так и на значительном удалении от него (более 400 мкм). Однако степень ответов по мере увеличения расстояния от зоны имплантата снижалась. Обнаруживалось диффузное утолщение склеры на 25-30% по сравнению со второй опытной группой, на 30-35 % по сравнению с первой контрольной группой и на 35-40 % по сравнению со второй контрольной группой животных. Признаки пролиферативной и апоптотической активности в сетчатке глаза крысы под зоной введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой опытной группе отсутствовали.




    На 60-е сутки имплантации у контрольных животных участок хирургического вмешательства выявлялся в виде ограниченной зоны рубцовых тканей в конъюнктиве. В первой опытной группе сохранялись в значительной степени разрушенные остатки биоимплантата, в котором практически отсутствовали частицы нанодисперсной плаценты. Во второй опытной группе частицы крупнодисперсной плаценты находились свободно в соединительнотканной основе конъюнктивы, располагаясь между клетками лимфоидного ряда. Вокруг донорских структур в первой опытной группе образовалась капсула, внутренние слои которой состояли из эпителиоидных клеток и крупных макрофагов. Наружные слои капсулы состояли из вновь образованной рыхлой соединительной ткани с множеством вновь сформированных сосудов, активных фибробластов. Новообразованная соединительная ткань по плотности приближалась к отдаленной от зоны имплантации. Макромолекулярная организация вновь образованных коллагеновых волокон указывала на достаточную степень их морфологической зрелости. Волокнистая организация межклеточного вещества склеры приобретала упорядоченный характер. Данные процессы проявлялись при введении биоимплантата с крупнодисперсной плацентой в значительно меньшей степени. Толщина склеры во второй опытной группе на 23 % меньше по отношению к первой опытной группе, во второй контрольной группе на 27 % меньше в сравнении с первой опытной группой, а во второй контрольной группе на 31 % меньше по отношению к первой опытной группе животных.




     При иммуногистохимическом исследование с определением экспрессии Ki-67 ПАП-методом на 60-е сутки эксперимента выявлено, что сохранялась пролиферативная активность клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глазного яблока вокруг биоимплантата с нанодисперной плацентой в первой опытной группе (Рисунок 140), хотя степень выраженности уменьшилась в сравнении с предыдущим сроком наблюдения (30 суток). Отмечалась низкая пролиферативная активность в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой (Рисунок 141), остаточная пролиферативная активность в зоне имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины (Рисунок 142) и практически отсутствовала пролиферативная активность в зоне разреза конъюнктивы во 2-ой контрольной группе (Рисунок 143). Полученные данные пролиферативной активности клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глаза животного в ответ на хирургическую манипуляцию распределяются по группам исследования и согласуются с результатами наблюдения предыдущего срока эксперимента, хотя интенсивность изменений значительно снизилась.




    При иммуногистохимическом исследовании с определением экспрессии Caspase-3 ПАП-методом на 60-е сутки было выявлено, что наблюдался достаточно высокий уровень апоптоза клеток соединительнотканной основы конъюнктивы глаза крысы вокруг биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой опытной группе (Рисунок 144). Отмечалась умеренная апоптотическая активность в зоне введения биоимплантата с крупнодисперсной плацентой во второй опытной группе (Рисунок 145), низкая апоптотическая активность в зоне имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины в первой контрольной группе (Рисунок 146) и единичные апоптозы в зоне разреза конъюнктивы во 2 -ой контрольной группе (Рисунок 147). Данные также согласовались с предыдущим сроком исследования, но проявления реакций были менее выражены.




     Проведенные морфометрические исследования отражены в Таблице 8 и Таблице 9. Динамика изменения количества клеток за период наблюдения изображена в диаграмме (Рисунок 148). Количество делящихся клеток определялось в поле наблюдения равном 0,01 мм² . При этом достоверно значимо определялось большее количество делящихся клеток в зоне хирургической манипуляции в первой опытной группе при введении биоимплантата с нанодисперсной плацентой, чем во второй опытной группе (p < 0,05) и тем более в контрольных группах (p < 0,001). Высчитывался индекс пролиферативной активности как процентное отношение клеток находящихся в состоянии пролиферации к общему количеству клеток на единицу площади. За единицу площади определяли поле зрения равном 0,01 мм² . Индекс пролиферативной активности за весь период наблюдения составил в среднем (М ± σ) соответственно в первой опытной группе – 39,3 ± 1,5%, во второй опытной группе – 28,1 ± 1,1%, в первой контрольной группе – 24,1 ± 0,7%, во второй контрольной группе – 15,3 ± 0,7% (Таблица 231 12). В свою очередь индекс апоптотической активности за весь период наблюдения составил в среднем (М ± σ) соответственно в первой опытной группе – 0,43 ± 0,009%, во второй опытной группе – 0,34 ± 0,008%, в первой контрольной группе – 0,20 ± 0,007%, во второй контрольной группе – 0,14 ± 0,008% (Таблица 13).




     Итак, пролиферативная активность соединительной ткани в зоне введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в первой опытной группе была выше на 11,2 %, чем во второй опытной группе при введении биоимплантата с крупнодисперсной плацентой, на 15,2 % выше, чем в первой контрольной группе при имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины и на 24 % выше, чем при выполнении разреза конъюнктивы глаза крысы во второй контрольной группе. Другими словами, отмечено повышение пролиферативной активности в зоне введения биоимплантата с нанодисперсной плацентой в 1,4 раза в сравнении с введением крупнодисперсного аналога (опыт № 2) и в 2,6 раза в сравнении с разрезом без имплантации какого-либо изделия (контроль № 2).




    Достоверной разницы при морфометрии площади ядра делящихся клеток (Ki67+-клетки) как при сравнении между обследуемыми группами, так и в рамках одной группы, но в разные сроки, не наблюдалось (Таблица 11).




     Оценивалась апоптотическая активность соединительнотканных образований конъюнктивы глаза крысы в вышеописанные сроки в зоне хирургической манипуляции по уровню клеток, находящихся в стадии апоптоза, к 100 клеткам соединительной ткани конъюнктивы. Данные приведены в Таблице 13.




    Отсюда следует, что нанодисперсная плацента, обладая высокой степенью диспергированности, вероятно, одновременно приобретает новые специфичные для неё свойства. Так, в результате интенсивного механического измельчения происходит значительно разрушение макромолекулярных комплексов, с изменением их стереометрических параметров, изменением антигенных свойств материала, повышение проницаемости (биоактивности) и гидрофильности. При этом нанодисперсная плацента значительно усиливает процессы пролиферации в соединительнотканных структурах реципиента в зоне его введения. Кроме того, повышаются регенеративные свойства склеральной ткани при её изначально низкой пролиферативной активности. Всё это, с учетом повышенной диффузионной способности может быть основой для повышения биологической активности исследованного нанодисперсного материала. Это позволяет шире варьировать объём введения донорских тканей, уменьшить травматические последствия хирургического вмешательства.




     5.1.3 Морфологические исследования степени репаративной активности многослойного эпителия конъюнктивы глаза крысы над зоной хирургической манипуляции




    Оценка степени репаративной активности многослойного эпителия конъюнктивы производилась в тех же группах экспериментальных животных (крыс), участвующих в исследовании репаративной активности непосредственно зоны имплантации биологического материала. Как уже отмечалось ранее, в первой опытной группе под конъюнктиву на склеру глаза крысы вводили биоимплантат с нанодисперсной плацентой. Во второй опытной группе вводили биоимплантат с крупнодисперсной плацентой. В первой контрольной группе имплантировали фрагмент отрезка сосуда пуповины, равный по диаметру и длине фрагмента отрезка сосуда используемого для приготовления биоимплантата. Вторая контрольная группа животных – ложнооперированные. Морфологические исследования производили через 7, 30 и 60 суток после манипуляций.




     При оценке пролиферативной активности многослойного эпителия конъюнктивы глаза крысы над зоной хирургического вмешательства применяли моноклональные антитела к негистогенному белку Ki-67, который определяется в ядрах клеток во время поздней G-фазы, S, G2 и M, но не в G 0 -фазе клеточного цикла. Пролиферативную активность многослойного эпителия конъюнктивы глаза крысы оценивали как процент Ki-67+-клеток от общего числа клеток эпителия конъюнктивы в поле зрения равном 0,01 мм² . Изображения эпителия в первой опытной группе с введением биоимплантата с нанодисперсной плацентой в разные сроки экспериментального исследования представлены на Рисунке 149, Рисунке 150 и Рисунке 151.




    Изображения эпителия во второй опытной группе при введении биоимплантата с крупнодисперсной плацентой в расзные сроки экспериментального исследования представлены на Рисунке 153, Рисунке 154 и Рисунке 155.




     Изображения эпителия в первой контрольной группе при имплантации фрагмента отрезка сосуда пуповины без наполнения его плацентой представлены на Рисунке 155, Рисунке 156 и Рисунке 157.




     Изображения эпителия в контрольной группе при проведении хирургической манипуляции без имплантации какого-либо биологического материала представлены на Рисунке 158, Рисунке 159 и Рисунке 160.




     В результате проведённых исследований было установлено, что достоверно значимо усиливалась пролиферативная активность эпителия конъюнктивы глаза крысы над зоной введения биоимплантата в обеих опытных группах в сравнении с контрольной группой с введением фрагмента отрезка сосуда пуповины, не запоненного плацентарной тканью (Таблица 14). При этом индекс пролиферации высчитывался как процентное отношение количества пролиферирующих клеток в многослойном эпителии конъюнктивы глаза крысы к общему количеству клеток эпителия в поле зрения равном 0,01 мм² . Измерялась также толщина многослойного эпителия конъюнктивы над зоной хирургического вмешательства от базальной мембраны камбиального слоя до верхней границы наружных клеток. Данные представлены в Таблице 15.




     Из представленных в Таблице 15 данных видно, что в обеих опытных группах достоверно увеличивалась толщина многослойного плоского неороговевающего эпителия конъюнктивы над зоной хирургического вмешательства, при этом достоверной разницы между опытными группами не отмечено. Имплантация же фрагмента отрезка сосуда пуповины без содержания в нём плаценты также приводила к утолщению многослойного эпителия конъюнктивы над зоной хирургического вмешательства достоверно в сравнении со второй контрольной группой, однако степень утолщения была значительно меньше, чем у животных в первых двух опытных группах.




     Следовательно, введение биоимплантата в соединительнотканную основу конъюнктивы глаза усиливало пролиферативную активность и в многослойном плоском неороговевающем эпителии конъюнктивы над зоной имплантации, что сопровождалось достоверно значимым увеличением экспрессии Ki-67 в базальных слоях эпителия. При этом более выраженная пролиферативная активность наблюдалась при имплантации биоимплантата с нанодисперсной плацентой. Также отмечалась пролиферативная активность базального и частично шиповатого слоя эпителия, сопровождающаяся увеличением высоты клеток в пределах базальных рядов указанных структур.




     Всё это сопровождалось увеличением толщины эпителия, преимущественно за счёт пролиферативно активных зон со смещением регенераторно-активных клеток в поверхностные ряды многослойного плоского неороговевающего эпителия конъюнктивы глаза крысы.




    Таким образом, в результате второй серии основного этапа экспериментальных методов исследования установлено, что введение биоимплантата с нанодисперсной плацентой усиливает регенеративные процессы в соединительнотканных структурах глазного яблока в 1,4 раза в сравнении с крупнодисперсным аналогом, а также индуцирует фибробластические процессы в интактной склере.